1. 前期準(zhǔn)備
- 實(shí)驗(yàn)材料:獲取神經(jīng)干細(xì)胞(如從胚胎腦組織分離)、微重力模擬裝置項目、神經(jīng)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基(含 B27 添加劑損耗、EGF競爭激烈、bFGF 的 DMEM/F12 培養(yǎng)基)交流等、多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)容器使用、無(wú)菌器械等方案。
- 設(shè)備準(zhǔn)備:與腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)類似廣度和深度,調(diào)試賽奧維度CellSpace-3D微重力三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)情況正常,確保溫度製度保障、氣體環(huán)境適宜。
2. 細(xì)胞分離與接種
- 細(xì)胞分離:解剖獲取胚胎腦組織各領域,在無(wú)菌條件下剪碎顯示,用胰蛋白酶消化后,通過(guò)機(jī)械吹打制成單細(xì)胞懸液的有效手段,過(guò)濾去除組織塊共同努力,離心收集細(xì)胞。
- 接種:將神經(jīng)干細(xì)胞以 2 - 3×10? 個(gè)/mL 的密度接種到微重力培養(yǎng)裝置中真正做到,因神經(jīng)干細(xì)胞易貼壁持續,包被多聚賴氨酸可促進(jìn)貼壁。
3. 培養(yǎng)過(guò)程
- 每 2 - 3 天添加適量新鮮培養(yǎng)基,維持營(yíng)養(yǎng)成分高品質。觀察細(xì)胞神經(jīng)球形成情況,神經(jīng)球直徑達(dá)到一定大小時(shí)互動講,可進(jìn)行傳代培養(yǎng)統籌。
- 采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物(如 Nestin)的表達(dá),以鑒定細(xì)胞特性的特點。
4. 誘導(dǎo)分化:培養(yǎng)一定時(shí)間后高質量,可更換為含血清的分化培養(yǎng)基,在微重力環(huán)境下誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞等分化迎難而上,通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞標(biāo)志物(如 β - Tubulin III 用于神經(jīng)元有效保障,GFAP 用于星形膠質(zhì)細(xì)胞)評(píng)估分化效果。
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