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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及設(shè)備

更新時(shí)間:2022-04-14瀏覽:2683次

   一高產、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及設(shè)備

  (一) 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置
  組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作高效化,避免微生物及其他有害因素的影響.目前,超凈工作臺(tái)的廣泛使用培養,很大程度上方便了組織細(xì)胞培養(yǎng)工作不同需求,并使一些常規(guī)實(shí)驗(yàn)室有可能用于進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng).
  細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行六方面的工作:無菌操作有序推進、孵育覆蓋、制備製度保障、清洗統籌發展、消毒滅菌處理穩步前行、儲(chǔ)藏至關重要。
  1.無菌操作區(qū)
  (1)無菌操作室:無菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域指導,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾建設項目。
  理想的無菌操作室應(yīng)劃為三部分:
  a)更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩服務品質。
  b)緩沖間—―位于更衣間與操作間之間傳遞,目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境,同時(shí)可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
  c)無菌操作間—―專用于無菌操作助力各行、細(xì)胞培養(yǎng)經過。其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果互動互補;墻壁光滑*以便清潔和消毒.工作臺(tái)安置不應(yīng)靠墻壁核心技術體系,臺(tái)面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察力度。
  無菌操作間的空氣消毒:
  紫外線燈—-產(chǎn)生臭氧新產品,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康持續發展。
  空氣過濾的恒溫恒濕裝置—-最好更加廣闊。
  表1潔凈室(區(qū))空氣潔凈度級(jí)別表
  潔凈度級(jí)別塵粒最大允許數(shù)/立方米微生物最大允許數(shù)浮游菌/立方米沉降菌/皿
  100級(jí)3,500051
  10000級(jí)350合作,0002,0001003
  100000級(jí)3,500,00020,00050010
  300000級(jí)10,350,00060,000-15
  無臭氧紫外線消毒器
  電子消毒滅菌器—-在高壓電場(chǎng)作用下善謀新篇,電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧開展面對面。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑供給,能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng),從而靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的便利性,消毒時(shí)沒有死角拓展應用。消毒后空間的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,空氣不留異味,消毒物體表面不留殘毒實事求是。
 ∽詣踊桨?。?)凈化工作臺(tái):操作簡(jiǎn)單,安裝方便結構,占用空間小且凈化效果很好空間廣闊。一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺(tái)主要有兩種:a)側(cè)流式或稱垂直式b)外流式或稱水平層流式落到實處。
  凈化工作臺(tái)工作原理(大致相同)--通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過濾器精濾營造一處,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過無菌區(qū),從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境線上線下。
  側(cè)流式工作臺(tái)—-空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過工作臺(tái)面流向?qū)?cè)設計能力,也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè),形成氣流屏障保持工作區(qū)無菌有序推進。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為封閉式適應性。
  外流式(水平式)工作臺(tái)—-凈化后的空氣面向操作者流動(dòng),因而外方氣流不致混入操作深入開展,但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作則對(duì)操作者不利更優美。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為開放式(已少用)。
  凈化工作臺(tái)應(yīng)用注意:
  (1)凈化工作臺(tái)應(yīng)安裝在隔離好的無菌間或清潔無塵的房間內(nèi),以免塵土過多易使過濾器阻塞,降低凈化效果求得平衡,縮短其使用壽命。
 〉缆?。?)新安裝的或長(zhǎng)期未使用的工作臺(tái)面向,工作前必須對(duì)工作臺(tái)和周圍環(huán)境用真空吸塵器或不產(chǎn)生纖維的工具進(jìn)行清潔工作,然后再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌進(jìn)行滅菌處理。
 】臻g廣闊。?)使用凈化工作臺(tái)前合作關系,應(yīng)先用75%酒精擦洗臺(tái)面,并提前以紫外線滅菌燈照射30~50min處理凈化工作區(qū)內(nèi)積存的微生物.關(guān)閉滅菌燈后應(yīng)啟動(dòng)風(fēng)機(jī)使之運(yùn)轉(zhuǎn)兩分鐘后再進(jìn)行培養(yǎng)操作研學體驗。
 〗Y構不合理。?)凈化工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品,以保持潔凈氣流流型不受干擾深刻內涵。
  (5)注意凈化區(qū)內(nèi)氣流的變化競爭力,一旦感到氣流變?nèi)酰缇凭珶艋鹧娌粍?dòng)逐步改善,加大電機(jī)電壓仍未見情況改變則說明濾器已被阻塞特點,應(yīng)及時(shí)更換。一般情況下落實落細,高效過濾器三年更換一次意見征詢。更換高過濾器應(yīng)請(qǐng)專業(yè)人員操作,以保持密封良好深入闡釋。粗過濾器中的過濾布(無紡布)應(yīng)定期清洗更換集聚,時(shí)間應(yīng)根據(jù)工作環(huán)境潔凈程度而定,通常間隔3—6個(gè)月進(jìn)行一次大大提高。
 ⌒碌膭恿?。?)凈化工作臺(tái)使用完畢應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)面上的物品并用酒精擦洗臺(tái)面使之始終保持潔凈完成的事情。
  (7)凈化工作臺(tái)應(yīng)定期進(jìn)行功能測(cè)試初步建立,檢查凈化工作臺(tái)各項(xiàng)工作指標(biāo)是否達(dá)到要求,例如進(jìn)行無菌試驗(yàn)項目,定期檢查臺(tái)面空氣的潔凈度是否達(dá)標(biāo).
  超凈工作臺(tái)的無菌程度檢查超凈工作臺(tái)在消毒處理后,無菌試驗(yàn)前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù)重要方式;取直徑約90mm平皿綜合運用,在超凈工作臺(tái)內(nèi)點(diǎn)燃酒精燈,在酒精燈旁增產,以無菌操作脫穎而出,將平皿半開注入溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20ml,制成平板的方法,在30~35℃預(yù)培養(yǎng)48小時(shí)積極影響,證明無菌后將平板3個(gè),以無菌方式帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)左生產創效、中進一步提升、右各放一個(gè);打開平皿蓋扣置,平板在空氣中暴露30分鐘后將平皿蓋蓋好,置30~35℃培養(yǎng)48小時(shí)緊密協作,取出檢查提供有力支撐,100級(jí)清潔度要求:3個(gè)平皿上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均不得超過1個(gè).
  超凈工作臺(tái)應(yīng)定期請(qǐng)有關(guān)部門檢查其潔凈度,應(yīng)達(dá)到100級(jí)(一般用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀)檢測(cè)塵埃粒徑≤5祄的粒數(shù)不得超過3。5個(gè)/升越來越重要;空氣流量應(yīng)控制在0.75~1.0m3/s;細(xì)菌菌落數(shù)平均<1個(gè),可根據(jù)無菌狀況必要時(shí)置換過濾器優化上下。
  2.孵育區(qū)
  本區(qū)對(duì)無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴(yán)格改革創新,但仍需清潔無塵,因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域發揮重要作用。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行自行開發,后者費(fèi)用高,一般實(shí)驗(yàn)室多采用孵箱進(jìn)行工作.
  3.制備區(qū)
  在該區(qū)主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備取得顯著成效。
  4.儲(chǔ)藏區(qū)
  主要存放各類冰箱處理方法、干燥箱、液氮罐振奮起來、無菌培養(yǎng)液建立和完善、培養(yǎng)瓶等特征更加明顯,此環(huán)境也需要清潔無塵.
  5.清洗和消毒滅菌區(qū)
  清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開增多,主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作規模設備。
  (二)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備
  組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實(shí)驗(yàn)室的普通常規(guī)設(shè)備外支撐作用,尚有一些特殊需要的設(shè)備≈陵P重要;究煞譃閮纱箢悾旱谝活悶槌S玫幕驹O(shè)備;第二類為較高級(jí)的特殊設(shè)備.
  1著力提升。常用的基本設(shè)備
  (1)儀器:
  a)顯微鏡:倒置顯微鏡—-是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一建設項目,便于掌握細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并觀察有無污染等動手能力。
  ——若有條件,尚可配置帶有照相系統(tǒng)的高質(zhì)量相差顯微鏡傳遞、解剖顯微鏡充分、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時(shí)電影拍攝裝置等的發生,以便隨時(shí)觀察融合、記錄、攝影細(xì)胞生長(zhǎng)情況相結合。
  a)培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣提升,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下相關性,最適溫度是37℃,溫差變化一般不應(yīng)超過±0競爭力。5℃,細(xì)胞在溫度升高2℃時(shí)示範,持續(xù)數(shù)小時(shí)即不能耐受技術節能,40℃以上將很快死亡.因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱發展基礎。
  恒溫培養(yǎng)箱——應(yīng)選隔水式或晶體管自控溫培養(yǎng)箱延伸,此類培養(yǎng)箱靈敏度高,溫度控制較穩(wěn)定要求。一般的恒溫培養(yǎng)箱價(jià)格較便宜,其缺點(diǎn)是只宜于作密閉式培養(yǎng)。
  CO2培養(yǎng)箱—-目前多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%)運行好,易于使培養(yǎng)液的pH保持穩(wěn)定,適用于開放或半開放培養(yǎng)國際要求。培養(yǎng)細(xì)胞的器皿可用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶同期;當(dāng)使用培養(yǎng)瓶時(shí),可將瓶蓋略微旋松新趨勢,使培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)與外界保持通氣狀態(tài)。由于這種培養(yǎng)方法培養(yǎng)器皿內(nèi)部與外界相通行動力,培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須保持清潔結構,應(yīng)定期以紫外線照射或酒精消毒。同時(shí)培養(yǎng)箱應(yīng)放置盛有無菌蒸餾水的水槽,防止培養(yǎng)液蒸發(fā),使箱內(nèi)相對(duì)濕度始終保持為100%效果。
  c)干燥箱:用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒.干熱消毒時(shí),電熱干燥箱升溫較高服務水平,一般需達(dá)到160℃以上線上線下。通常使用鼓風(fēng)式電熱干燥箱。其優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻能力建設、效果較好知識和技能,缺點(diǎn)是升溫過程較慢。升溫時(shí)不能先升溫后鼓風(fēng)而應(yīng)鼓風(fēng)與升溫同時(shí)開始醒悟,至100℃時(shí)協同控製,停止鼓風(fēng),應(yīng)避免包裹器皿的紙或棉花燒焦高效利用,燒焦的碎屑可影響細(xì)胞的生長(zhǎng)體驗區。消毒后,不能立即打開箱門以免驟冷而導(dǎo)致玻璃器皿損壞,應(yīng)等候溫度自然下降至100℃以下方可開門品質。
  d)水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水的質(zhì)量要求較高提供了遵循,細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。水純化時(shí)可采用離子交換裝置或蒸餾器能運用。離子交換純水尚不能有效去除有機(jī)物利用好,因此用水時(shí)尚需再次蒸餾。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗講理論,也應(yīng)使用二次以上蒸餾水.
  目前國內(nèi)使用較多的是自動(dòng)雙重純水蒸餾器(石英管加熱),使用方便有望,安全、蒸餾速度快(1600ml/h)解決問題。
  使用注意:
  ○a不可采用普通自來水蒸餾服務效率,以免蒸餾器內(nèi)很快結(jié)成水垢影響蒸餾效果;同時(shí),還需視蒸餾器內(nèi)存水垢程度定期*清洗蒸餾器.
  ○b正確的使用方法是將經(jīng)金屬蒸餾器蒸餾的蒸餾水加入玻璃蒸餾器內(nèi)進(jìn)行再次蒸餾。
  一般配制培養(yǎng)液的用水應(yīng)在配液前蒸餾導向作用,不宜使用存放數(shù)日的三蒸水蓬勃發展,以免影響培養(yǎng)用水的質(zhì)量.
  目前市場(chǎng)上供應(yīng)的是含有各種級(jí)別和類型的采用一種或多種純化方法相結(jié)合的使普通水純化為純水和超純水的純水系統(tǒng)可供選擇。例如:設(shè)計(jì)靈活的可以掛壁重要意義、也可為臺(tái)式落實落細,也可以有儲(chǔ)水箱、也可直接用分液槍的純水裝置組成部分;還可根據(jù)各類實(shí)驗(yàn)用水需求選擇配備有效殺菌或去除DNA酶深入闡釋、RNA酶、蛋白酶等高效化,甚至可有效去除掉熱源大大提高、內(nèi)毒素的超濾型純水器狀態。
  e)冰箱:細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備
  ○a普通冰箱或冷藏柜
  —-儲(chǔ)存培養(yǎng)液、生理鹽水關規定、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。
  ○b低溫冰箱(—20℃)應用前景、超低溫冰箱
  —-用于儲(chǔ)存需要冷凍保存生物活性及較長(zhǎng)時(shí)期存放的制劑,如酶指導、血清等。
  ——細(xì)胞培養(yǎng)室的冰箱應(yīng)屬專用兩個角度入手,不得存放易揮發(fā)關註點、易燃燒等對(duì)細(xì)胞有害的物質(zhì),且應(yīng)保持清潔進入當下。
  f)細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器:儲(chǔ)存器常用的是液氮容器建強保護。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時(shí)要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟(jì))三種因素.液氮容器的大小可自25L~500L首次,可以儲(chǔ)存1ml的安瓿250~15000個(gè)左右流動性。液氮溫度可低達(dá)-196℃,使用時(shí)應(yīng)防止凍傷生產效率。由于液氮不斷揮發(fā)反應能力,應(yīng)注意觀察存留液氮情況,及時(shí)定期補(bǔ)充液氮競爭激烈,避免揮發(fā)過多而致細(xì)胞受損投入力度。
  目前,國內(nèi)各類實(shí)驗(yàn)室已廣泛使用新型的細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器學習。市場(chǎng)所提供的各種新型的細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器具有性能優(yōu)異技術,使用方便等特點(diǎn).例如:
  ——可通過*電子控制器實(shí)現(xiàn)凍存自動(dòng)化并監(jiān)測(cè)液氮水平和樣品溫度,確保樣品溫度始終處于設(shè)定溫度點(diǎn);
  -—可配備*報(bào)警系統(tǒng),分別警報(bào)液氮液面結構重塑、溫度、電池自行開發、電壓敢於挑戰、電源等失常情況:
  ——同時(shí)具備熱氣體旁路系統(tǒng),防止高于-130℃的暖空氣進(jìn)入液氮罐,從而更有效地保護(hù)樣品,防止升溫.
  另外,多種規(guī)格的*液氮運(yùn)輸應用擴展,供應(yīng)罐系列不僅移動(dòng)方便,還可通過連接管給儲(chǔ)存罐補(bǔ)充液氮過程中,提高工作效率,保證樣品安全建立和完善。
  g)離心機(jī):進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)特征更加明顯,常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度啟用、洗滌、收集細(xì)胞等工作,通常需要使用離心機(jī).
  ○a一般可常規(guī)配置4000rpm的國產(chǎn)臺(tái)式離心機(jī),例如細(xì)胞沉降達到,使用80~100g的離心機(jī)即可深入各系統,離心力過大有時(shí)可能引起細(xì)胞的損傷。
  ○b另外的可能性,可根據(jù)需要添置其他類型如大容量或可調(diào)節(jié)溫度的離心機(jī)等
  ○c若需特殊用途,例如某些細(xì)胞的分離制備需梯度離心進一步推進,則需另行配置實(shí)驗(yàn)所需的具備其他特殊功能的離心機(jī)。
  h)天平:常用的有扭力天平系列、精密天平及各種電子天平明確相關要求。
  分析天平的感量為0。1mg方案、0特點。01mg和0.001mg。根據(jù)稱取物質(zhì)的量和稱量精度的要求統籌發展,選擇適宜級(jí)別的天平品質。要求精密稱定時(shí),當(dāng)取樣量大于100mg選用感量為0.1mg天平慢體驗,在100-10mg選用感量為0.01mg天平體製,小于10mg選用感量為0。001mg天平即將展開。
  i)消毒器:直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理向好態勢。
  常用:○a手提式高壓蒸汽消毒器
  ○b目前市場(chǎng)上,具有高效創新科技、安全更默契了、方便等性能,適用于各種器皿、液體有很大提升空間、培養(yǎng)基的高壓滅菌裝置已在流通(如脈動(dòng)真空滅菌器)要求。可供使用者在滅菌的同時(shí)監(jiān)測(cè)滅菌容器內(nèi)的壓力和溫度認為,確保滅菌質(zhì)量和安全,并可通過記憶(儲(chǔ)存)支持系統(tǒng)改變各種參數(shù)(例如滅菌運行好、排氣、加熱等參數(shù))紮實,即使在進(jìn)行滅菌時(shí)發(fā)生停電故障同期,仍可保留所設(shè)定的參數(shù)
  j)濾器:目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液可能性更大、血清鍛造、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白使命責任、多肽共謀發展、生長(zhǎng)因子等物質(zhì)搖籃,這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細(xì)菌創造。
  目前常使用的濾器有Zeiss濾器使用、玻璃濾器和微孔濾器,各種濾器有其使用原理和特點(diǎn)(后詳述).
  (2)培養(yǎng)用器皿:
  a)培養(yǎng)器皿:供細(xì)胞接種、生長(zhǎng)等用的器皿,可由透明度好、無毒的中性硬質(zhì)玻璃或無毒而透明光滑的特制塑料制成不難發現。
  (a)玻璃培養(yǎng)器皿的優(yōu)點(diǎn)是多數(shù)細(xì)胞均可生長(zhǎng)聽得進,易于清洗、消毒合理需求,可反復(fù)使用,并且透明而便于觀察;缺點(diǎn)是易碎,清洗時(shí)費(fèi)人力全技術方案。
  (b)塑料制培養(yǎng)器皿的優(yōu)點(diǎn)是一次性使用,廠家已消毒滅菌密封包裝先進水平,打開即可用于細(xì)胞培養(yǎng)操作重要的。
  常用的培養(yǎng)器皿:
  培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)共享、繁殖細(xì)胞高端化。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養(yǎng)姿勢。國產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量(ml)表示充分發揮,如250ml、100ml有望、25ml等智能設備;進(jìn)口培養(yǎng)瓶則多以底面積(cm2)表示。
  培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成服務效率,供盛取不要畏懼、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性蓬勃發展、集落形成作用、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺雴栴}、?xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)使用.常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有10cm應用的選擇、9cm、6cm、3.5cm等.
  多孔培養(yǎng)板:為塑料制品大大縮短。可供細(xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測(cè)實(shí)驗(yàn)使用開放要求。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑高質量,可同時(shí)測(cè)試大量樣本構建,易于進(jìn)行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格大幅增加,常用的規(guī)格有:96孔平臺建設、24孔、12孔服務延伸、6孔先進技術、4孔等。
  各種單層生長(zhǎng)的細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中長(zhǎng)滿時(shí)可獲得的細(xì)胞數(shù),主要是取決于器皿的底表面積和細(xì)胞體積的大小貢獻力量。常用培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)(以Hela細(xì)胞為例)見表2.
  表2常用的培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)
  培養(yǎng)器皿底面(cm2)加培養(yǎng)液量(ml)可獲細(xì)胞量
  96孔培養(yǎng)板0.320.11×105
  24孔培養(yǎng)板21合作。05×105
  12孔培養(yǎng)板4。52.01×106
  6孔培養(yǎng)板9.62前景。52。5×106
  4孔培養(yǎng)板285。07×106
  3.5cm培養(yǎng)皿83.02.0×106
  6cm培養(yǎng)皿215進一步。05.2×106
  9cm培養(yǎng)皿4910.012.2×106
  10cm培養(yǎng)皿5510宣講手段。013。7×106
  25cm塑料培養(yǎng)瓶255.05×106
  75cm塑料培養(yǎng)瓶7515~302×107
  25ml玻璃培養(yǎng)瓶194部署安排。03×106
  100ml玻璃培養(yǎng)瓶37.510競爭激烈。06×106
  250ml玻璃培養(yǎng)瓶7815。07×107
  2500ml旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶700100~2502效果。0×108
  b)培養(yǎng)操作有關(guān)的器皿:
  ○a貯液瓶:主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液學習、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格改善,如1000ml、500ml、250ml了解情況、100ml參與能力、50ml、5ml等長期間。
  ○b吸管:主要分為刻度吸管新的力量、無刻度吸管∈悄壳爸髁??潭任苤饕糜谖》窒?、轉(zhuǎn)移液體,常用的有1ml便利性、2ml開展研究、5ml、10ml等規(guī)格信息化。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管力量,除可以作吸取可靠、轉(zhuǎn)移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打方式之一、混勻及傳代細(xì)胞我有所應。
  ○c加樣器(移液器):用于吸取、移動(dòng)液體或滴加樣本首要任務」芾??筛鶕?jù)需要調(diào)節(jié)量的大小,吸量準(zhǔn)確深入實施、方便應用提升。尤以微量加樣器,可保證實(shí)驗(yàn)樣品(或試劑)含量精確,重復(fù)性良好。目前業務指導,可高溫消毒的新品技,多通道的各類移液器可供使用者選擇,能確保加樣準(zhǔn)確、快速重要的角色、方便并且達(dá)到無菌要求.
  c)其他用品:尚有收集細(xì)胞用的離心管空間載體,放置試劑或臨時(shí)插置吸管用的試管體製,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭要落實好,封閉各種瓶、管的膠塞向好態勢、蓋子相對簡便、凍存細(xì)胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器更默契了、燒杯和量筒以及漏斗特性,超凈工作臺(tái)使用的酒精燈,供實(shí)驗(yàn)人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等流程。
  (3)器械:主要用于解剖共創輝煌、取材、剪切組織及操作時(shí)持取物件等特點。常用的有:手術(shù)刀或解剖刀使用、手術(shù)剪或解剖剪(彎剪及直剪),用于解剖動(dòng)物不合理波動、分離及切剪組織,制備原代培養(yǎng)的材料建言直達;眼科虹膜小剪(彎剪或直剪),用于將組織材料剪成小塊;血管鉗及組織鑷助力各業、眼科鑷(彎大部分、直),用于持取無菌物品(如小蓋玻片)夾持組織等將進一步;口腔科探針或代用品,用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊更加堅強。
  2提供有力支撐、特殊設(shè)備
  細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室除了應(yīng)配備上述的常用基本設(shè)備以外,如有條件,可添置一些特殊或*設(shè)備儀器,以便更有效基礎、更精確日漸深入、更深入地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室工作。例如:
 ∫I作用。?)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀—-可用于進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定及細(xì)胞毒性預期、藥物敏感性檢測(cè)等。
 ?。?)超低溫冰箱(-85℃)——便于儲(chǔ)存某些試劑及標(biāo)本合理需求。
  (3)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng)。
 』厩闆r。?)熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察先進水平。
  (5)流式細(xì)胞儀-—可更精確及快速檢測(cè)細(xì)胞充分發揮。
 」蚕?。?)用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器,例如專門為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營養(yǎng)成分、代謝產(chǎn)物及氣體含量設(shè)計(jì)的多功能細(xì)胞培養(yǎng)分析儀全面展示、手提式CO2濃度測(cè)定儀等姿勢。

 

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