幾個基本原則：1. 必須是現(xiàn)有機(jī)器配置可以檢測到的。2. 對于多色實驗，熒光素本身的熒光強(qiáng)度和抗原表達(dá)的水平應(yīng)該是反比橫向協同。簡單的說表達(dá)多的抗原所使用的熒光素要選相對較暗的，而表達(dá)低的就選較亮的廣泛關註。3. 多色實驗選不同激光激發(fā)，釋放光譜重疊小的熒光素機製。

光源的選擇主要根據(jù)被激發(fā)物質(zhì)的激發(fā)光譜而定各項要求。氬離子激光器的發(fā)射光譜中，綠光514nm和藍(lán)光488nm的譜線強(qiáng)發力，約占總光強(qiáng)的80%優勢與挑戰；氪離子激光器光譜多集中在可見光部分，以647nm較強(qiáng)越來越重要的位置。免疫學(xué)上使用的一些熒光染料激發(fā)光波長在550nm以上問題分析，可使用染料激光器。將有機(jī)染料做為激光器泵浦的一種成份解決方案，可使原激光器的光譜發(fā)生改變以適應(yīng)需要即構(gòu)成染料激光器不負眾望。例如用氬離子激光器的綠光泵浦含有Rhodamine 6G水溶液的染料激光器，則可得到550～650nm連續(xù)可調(diào)的激光交流研討，尤在590nm處轉(zhuǎn)換效率高推動並實現，約可占到一半。紫色激光器熒光染料 405 nm 激發(fā)順滑地配合。適用于豐度較高的抗原更加完善。綠色和黃綠色激光器的熒光染料 532 561 nm 激發(fā)。用于配有合適的濾光片通道的流式細(xì)胞儀光耐受強(qiáng)并且不依賴于PH值上高質量，是熒光顯微鏡技術(shù)的選擇藍(lán)光激光器熒光染料 488 nm 激發(fā)精準調控。適用于熒光顯微鏡技術(shù)。紅光激光器熒光染料 633 nm 激發(fā)相對較高。適用于配備氦氖激光器或紅色二極管激光器的流式細(xì)胞儀